《植物生理学报》 2008, 44(3): 469-475

采用RNA 干扰技术分析拟南芥Ca2+ 泵基因ECA1 的功能

朱炜^1,2，黄丛林¹，张秀海¹，王永勤¹，魏建民²，于荣³，吴忠义^1,*

1 北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心，北京100097；2 内蒙古农业大学生物工程学院，呼和浩特010018；3 首都师范大学生命科学学院，北京100037

通信作者：吴忠义；E-mail: zwu22@126.com

摘　要：

构建了含拟南芥 Ca2+ 泵基因 ECA1 特异片段反向重复结构的 RNA 干扰(RNAi)载体，以根癌农杆菌介导转化拟南 芥，用卡那霉素筛选和 PCR 检测，获得了 11 个 T3 代纯合体转基因株系；半定量 RT-PCR 方法检测 ECA1 在转基因株系中 转录的结果表明，其转录产物比野生型(WT)明显低，且转基因株系之间差异明显，表达水平有一个梯度关系；在 1/2MS 培养基上转基因株系与野生型的差异不明显，相对于野生型而言，在相对低 Ca2+ (0.2 mmol•L-1)或相对高 Mn2+ (0.5 mmol•L-1) 的培养基上的转基因株系生长受到不同程度的抑制，ECA1 转录量越低，生长受到的抑制越大。据此认为：ECA1对植物的 生长发育和抵御逆境胁迫有作用。

关键词：Ca2+ 泵；RNA 干扰(RNAi) ；转录后基因沉默

收稿：2008-03-19   修定：2008-05-20

资助：国家自然科学基金(30400228、30600318)和北京市自然科学基金(5062 012)。

采用RNA 干扰技术分析拟南芥Ca2+ 泵基因ECA1 的功能

朱炜^1,2，黄丛林¹，张秀海¹，王永勤¹，魏建民²，于荣³，吴忠义^1,*

1 北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心，北京100097；2 内蒙古农业大学生物工程学院，呼和浩特010018；3 首都师范大学生命科学学院，北京100037

Corresponding author: ; E-mail: zwu22@126.com

Abstract:

构建了含拟南芥 Ca2+ 泵基因 ECA1 特异片段反向重复结构的 RNA 干扰(RNAi)载体，以根癌农杆菌介导转化拟南 芥，用卡那霉素筛选和 PCR 检测，获得了 11 个 T3 代纯合体转基因株系；半定量 RT-PCR 方法检测 ECA1 在转基因株系中 转录的结果表明，其转录产物比野生型(WT)明显低，且转基因株系之间差异明显，表达水平有一个梯度关系；在 1/2MS 培养基上转基因株系与野生型的差异不明显，相对于野生型而言，在相对低 Ca2+ (0.2 mmol•L-1)或相对高 Mn2+ (0.5 mmol•L-1) 的培养基上的转基因株系生长受到不同程度的抑制，ECA1 转录量越低，生长受到的抑制越大。据此认为：ECA1对植物的 生长发育和抵御逆境胁迫有作用。

Key words: Ca2+ 泵；RNA 干扰(RNAi) ；转录后基因沉默